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實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀工作原理解析圖

更新時(shí)間:2018-03-07      瀏覽次數(shù):3018

實(shí)時(shí)熒光定量PCR廣泛應(yīng)用于各級(jí)各類醫(yī)療機(jī)構(gòu)、大學(xué)及研究所、CDC、檢驗(yàn)檢疫局、獸醫(yī)站、食品企業(yè)及乳品廠等。實(shí)時(shí)熒光定量pcr儀由熒光定量系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)組成,用來監(jiān)測(cè)循環(huán)過程的熒光。與實(shí)時(shí)設(shè)備相連的計(jì)算機(jī)收集熒光數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)通過開發(fā)的實(shí)時(shí)分析軟件以圖表的形式顯示。原始數(shù)據(jù)被繪制成熒光強(qiáng)度相對(duì)于循環(huán)數(shù)的圖表。原始數(shù)據(jù)收集后可以開始分析。實(shí)時(shí)設(shè)備的軟件能使收集到的數(shù)據(jù)進(jìn)行正常化處理來彌補(bǔ)背景熒光的差異。正常化后可以設(shè)定域值水平,這就是分析熒光數(shù)據(jù)的水平。

實(shí)時(shí)熒光定量Pcr儀主要工作原理:

標(biāo)記有熒光素的Taqman探針與模板DNA混合后,完成高溫變性,低溫復(fù)性,適溫延伸的熱循環(huán),并遵守聚合酶鏈反應(yīng)規(guī)律,與模板DNA互補(bǔ)配對(duì)的Taqman探針被切斷,熒光素游離于反應(yīng)體系中,在特定光激發(fā)下發(fā)出熒光,隨著循環(huán)次數(shù)的增加,被擴(kuò)增的目的基因片段呈指數(shù)規(guī)律增長(zhǎng),通過實(shí)時(shí)檢測(cè)與之對(duì)應(yīng)的隨擴(kuò)增而變化熒光信號(hào)強(qiáng)度,求得CT值,同時(shí)利用數(shù)個(gè)已知模板濃度的標(biāo)準(zhǔn)品作對(duì)照,即可得出待測(cè)標(biāo)本目的基因的拷貝數(shù)。

工作原理解析圖:

實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀工作原理解析圖

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